OBSERVACIONES Y PAISAJES HEMATOLÓGICOS
Para observar el cómo es la sangre que nos da la vida existen con muy diversas categorías los siguientes aparatos :
1/ Microscopio de campo claro.
2/ Microscopio de campo oscuro.
3/ Microscopio de Contraste de Fase
TÉCNICAS DE OBSERVACIÓN___
La primera operación consiste en fijar el producto a estudiar sobre un portaobjetos transparente al cual deberá quedar adherido. Para conseguirlo con bacterias se usa el calor moderado, para hacerlo con células sanguíneas basta el secado al aire seguido de un baño de metanol, para anatomía patológica hay que fijar habitualmente con formol y después de congelados o incluídos en parafina y así poder cortar planos muy delgados y montarlos sobre dicho portaobjetos antes de teñirlo, y para microscopía electrónica se hace un fijado con impregnación de sales de plomo con el objeto de que se depositen en las estructuras orgánicas y así puedan apreciarse la más pequeñas partículas del especímen por la capacidad de este pesado metal para absorber los electrones emitidos, dejando impresas sus imágenes bien en un una pantalla sensible o en un cliché fotográfico.
En el primer instrumento : Microscopio de campo claro, el más antiguo se pueden observar todos aquellas partículas fijadas al portaobjetos que tengan una opacidad propia, pero para ver aquellas que no la tienen, gozando de total transparencia, es necesaria una tinción posterior al proceso de fijación.
En el segundo instrumento : Microscopio de campo oscuro la incidencia de la luz es desde el plano lateral en toda su circunferencia alrededor de la muestra, por lo que donde no existe materia alguna se ve oscuro y las partículas materiales brillan nítidamente ofreciendo un enorme poder resolutivo. También resultan muy interesantes y bellas las imágenes en fondo oscuro de especímenes teñidos previamente con las mismas tinciones utilizadas en campo claro que ahora por incidencia lumínica lateral (efecto Raman) cambian sus colores y hacen sumamente más visibles toda estructura más fina, como ocurre con los microtúbulos citoplásmicos.
El tercer instrumento : Microscopio de contraste de fase se basa en la genial idea de Zernike de transformar los cambios del índice de refracción de cada elemento celular en cambios de fase por lo que se producen interferencias luminosas con cambios en la absorción lumínica de los mismos. Con este instrumento se puede estudiar la vida celular si detenerla, pues no son necesarias ni la fijación ni la tinción. Es muy significativo el observar fenómenos como la fagocitosis, los movimientos de protozoos y los movimientos celulares espontáneos de los granulocitos en la sangre o bien emigrados a la saliva humana o a la orina. Se observa nítidamente esta agitación de los gránulos intraleucocitarios como un movimiento browniano, esta vez favorecido por bajas viscosidad viscosidad del medio y por incrementos variados de temperatura en las mitocondrias plasmáticas como bases energéticas que son.
El cuarto instrumento: Microscopio electrónico de Transmisión (M.E.T) , como ya se ha enunciado, funciona utilizando un chorro de electrones para chocar contra átomos de plomo adheridos por fijación a las más finas estructuras celulares, proyectando sobre un medio sensible a los electrones una fina imagen. Posee ésta un límite de ampliación muy superior a cualquier otro instrumento óptico. Cada partícula celular por pequeña que sea se ve así ampliada miles de veces descubriéndose infinidad de subpartículas a investigar.
El quinto instrumento: Microscopio Electrónico de Barrido (M.E.B) también utiliza corrientes electrónicas que se reflejan a lo largo de las superficies de la muestra, previamente metalizadas, donde sin penetración alguna reflejan los electrones lateralmente, dando por proyección sobre una pantalla sensible la imagen fidedigna y en relieve del especímen, por lo que así se denomina microscopio de barrido electrónico. Tiene mucho menor poder de ampliación que el ya citado cuarto instrumento (M.E.T.), de travesía electrónica a través de la estructura estudiar, pero da una idea muy exacta de sus dimensiones y de su relieve más fino..
Es de tener en cuenta que el primer, segundo, cuarto y quinto instrumento necesitan de una fijación en la muestra, sea de colorante o sea de un metal para poder ser apreciada, dada la transparencia de las materias a estudiar, sea con electrones o sea con fotones luminosos. Sin embargo el Microscopio de Contraste de Fase (Zernike) no requiere tinción previa, ya que se basa en hacer apreciables las diferencias de fase entre los fotones que atraviesan la muestra, lo que da una imagen visual y real en ella de sus diferentes índices de refracción de cada punto celular, y todo ello incluso en vivo.
Exhibiremos algunas imágenes y filmaciones de todos estos instrumentos.
PAISAJES HEMATOLÓGICOS.-
(para mejor observación se aconseja colocación horizontal del móvil y utilizar la máxima amplificación de las imágenes gráficas)
La sangre, nuestro medio de nutrición e hidratación y sistema de defensa ante las agresiones bacterianas y víricas, está compuesta por una gran mayoría de glóbulos rojos, células desprovistas de núcleo reproductor y una minoría de glóbulos blancos o leucocitos , mezcla de granulocitos y linfocitos ,junto con pequeños corpúsculos llamados "plaquetas", provenientes de otras células medulares ( denominadas megacariocitos), que circulan junto a todos ellos para prevenir, por coagulación, la pérdida de sangre en posibles hemorragias traumáticas.
Los llamados granulocitos poseen una importancia máxima frente a toda clase de infecciones externas, bien sean bacterias a las que destruyen por la agresión química de sus gránulos cargados de elementos enzimáticos emitidos fuera o por fagocitosis, o sea: por ingestión y posterior digestión con sus gránulos internos llegando a formar lagunas o lisosomas.
Veremos que dichos granulocitos, al pasar a medios externos de mayor presión osmótica, el que comienzan a agitar sus partículas de forma intensa, como ya dije, por fuerzas de movimiento browniano incrementadas por variaciones metabólicas de temperatura de mitocondrias que las mueven entre los elásticos microtúbulos del chasis o armazón plasmática, después de lo cual, rompiéndose la membrana celular, son liberados al medio externo. Veremos como esa agitación es elástica, pues las partículas chocan y rebotan en campos limitados por dichos microtúbulos en el leucocito vivo. En el torrente sanguíneo lo gránulos segregados acaban fijándose en cualquier cuerpo extraño al que digieren o a cualquier bacteria o virus al que marcado o no marcado por anticuerpos linfocitarios intoxican y matan o, en caso de resistencia, reducen sus movimientos mediante la aparición de redes de fibrina procedentes del fibrinógeno del medio plasmático sensibilizado por la agresión de dichos gránulos. Igual hacen en la orina, en la saliva o en los esputos siendo agentes de asepsia muy notable.
Es de señalar que en la sangre circulan granulocitos nacidos en la médula ósea y linfocitos nacidos en los ganglio linfáticos del cuerpo. Éstos últimos son los encargados de reconocer antígenos externos y capaces de crear anticuerpos proteínicos (Globulinas) que se fijarán en las bacterias o virus impidiendo su respiración o su nutrición y con ello su muerte. Todas las células sanguíneas tienen su tiempo de existencia y acaban también muriendo, de modo que el bazo y los ganglio linfáticos terminan eliminando los restos de estas células muertas , no obstante también se pueden observar alunas veces mientras van circulando por el torrente sanguíneo hacia estas depuradoras fisiológicas citadas.
Los granulocitos más voluminosos, dotados de un gran núcleo no alargado, sino frecuentemente lobulado se denominan en la sangre monocitos y cuando emigran a cualquier tejido inflamado se llaman macrófagos. Se encargan de la fagocitosis de partículas extrañas grandes que digieren y eliminan. Con los leucocitos forman la primera barrera defensiva y de limpieza contra cualquier clase de proteína desconocida, sea vírica o bacteriana.
Los linfocitos , más pequeños, dotados de mayor volumen nuclear, respecto del citoplásmico, nacidos en los ganglios linfáticos, se dividen en tres grupos T, B y NK. Los linfocitos T y B forman la unidad adaptativa. Los linfocitos T suelen sensibilizar, en momentos determinados, la actividad de los linfocitos B . Ambos, T y B, son agentes que descubren y sintetizan anticuerpos efectivos contra virus o bacterias , pudiendo regular la inflamación manteniendo la memoria de otras infecciones antiguas. Los linfocitos NK, de mayor tamaño, son llamados células asesinas porque neutralizan a cualquier elemento dotado de proteínas no idénticas al propio genoma, como son las células viejas que presentan cualquier variación molecular o bien las células cancerígenas que sufren atipias de proteínas del genoma, por lo que representan una verdadera defensa natural frente al cáncer.
Microscopio de Campo Claro.-
 |
| Pareja de neutrófilos en contacto. |
 |
| Granulocito Segmentado basófilo |
 |
| Granulocito Segmentado |
 |
| Granulocito en Cayado |
 |
| Granulocito Segmentado |
 |
| Linfocito |
Microscopio de Campo Oscuro Simple.
Saliva humana.- Se aprecia un gruesa célula de epitelio descamativo y bajo ella un monocito. Bordeando a esta célula algunos pequeños leucocitos segmentados.
Microscopio de Campo Oscuro + Coloración de Wright
No me resisto a publicar mis imágenes obtenidas mediante la aplicación de la mejor tinción existente de campo Claro para mejorar la visión con campo Oscuro. La coloración de Wright invierte sus tonalidades por efecto Raman al incidir la luz perpendicularmente al objeto, de modo que lo que era rosado o marrón ahora en fondo oscuro es amarillo o verde y lo que era azul oscuro, tal como los núcleos celulares, ahora se aprecia en excelentes rojos. Pero lo más interesante surge en que podemos apreciar con mucha más fidelidad la estructura de los microtúbulos celulares que se insinuaban grises como retículo endoplásmico en el Campo microscópico claro, ahora en tinción de Wright + campo oscuro con total claridad con un color marrón oscuro o negruzco en el citoplasma de los leucocitos e incluso a veces visible anexos a la membrana de los eritrocitos. Si amplias las imágenes siguientes lo podrás apreciar con mayor o menor evidencia en todas las células expuestas. Su importancia radica en que se trata del armazón responsable de la forma y elasticidad de la célula, que ha pasado inadvertido no solamente para la microscopía óptica sino incluso a la microscopía electrónica
 |
| . |
Extensa e intrincada red de de Microtúbulos de un segmentado.
Así podemos comprender la plasticidad celular de los leucocitos que son capaces de laminarse para atravesar las ultrafinas rendijas del epitelio vascular para poder salir del torrente sanguíneo pasando al seno de los tejidos inflamados o de las secreciones glandulares entre las que destaca la propia saliva o la orina, fluídos todos a los que bridan protección contra bacterias, gracias a la secreción de enzimas procedentes de sus gránulos, esos que agitan fuertemente dentro de las oquedades de la red elástica establecida por sus microtúbulos para disolverlos antes de segregarlos.
Microscopio de Contraste de Fase.
